《审讯室》是一部带有独特前提背景的警察剧：场景限定在警察审讯室。这部情节简单的剧集聚焦于警察和嫌疑犯之间激烈的内心攻防，上演了一系列猫鼠游戏。
玉儿2岁时家中巨变，被义父吴啸天收养，教授其医术。义父临死前让玉儿不忘家仇。后玉儿为复仇进入药商杜远山府上做丫鬟。当玉儿达到自己目的时，杜远山告知当年的真相，并且给了玉儿盘缠让其离开杜家。后杜府面临困境，玉儿因怀愧疚愿回杜家帮助渡过难关。杜远山之子杜明海早已对玉儿有情，他信玉儿真心帮助杜府，杜府上下却误会玉儿，杜远山却让她再进杜府。玉儿展示非凡医术和管理能力，成为杜府大管家，杜远山临终前将家业托给玉儿，玉儿也找到了失散的哥哥，即杜府大少爷杜明江，可杜明江却被欲望迷蒙了双眼，走上不归路。抗战爆发后，玉儿坚守杜府药厂，在新四军的帮助下，为抗日力量提供药材，为千万抗日战士制造良药。
晚清末年，社会动荡，深宫之中，文渊阁里净坛密藏宝图失窃，为争夺这份几乎能改天换地的宝藏，各方势力蠢蠢欲动。而曾接的御前带刀侍卫门三刀（秦俊杰 饰），也被内务府派遣，寻回宝图，并揪出背后势力。此时，天津大沽县内，一家客栈突发命案，从日本回来的九人无一生还，死状惨烈。因废除科举而弃笔从戎的县衙捕快王地保（庞瀚辰 饰）赶到现场，学识丰厚的他通过死者伤痕和作案手法，当场便判断出此案乃是棱西一带融天岭门人犯下，为了将凶手缉拿归案，王地保不顾县衙反对独自追凶。
杨金邦从小立志要当一名维护正义的法官，在孙中山“师夷长技以自强”的立国主张下留洋海外。正准备学成回国之际，突然接到父亲猝然离世的噩耗，而那奇怪的电文中又隐藏发报人对父亲死因的质疑。杨金邦毅然辍学回国，发誓要查明真相。面对对手布下的种种迷局，杨金邦以科学的实证和严密的逻辑揭破真相，他也从此走上了追求世道正义的探案之路。并连破“戏院枪击”等数宗迷案而声名鹊起。三年后，父亲真正死因的最大迷局浮出水面。但当他用确凿的证据对凶手约翰逊提出控诉时，英国领事馆却以外国公民在中国享有“治外法权”而让凶手登上了回国的邮轮。杨金邦终于觉醒，他立志要倾尽毕生去为身边民众追寻真正意义上的法律公正。
